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如何選擇更適合的ELisa試劑盒?

2021-09-28 [1774]

如何選擇更適合的ELisa試劑盒?通常ELisa試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑,前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀,使用方便,缺點是穩定性較差。與單試劑相比,雙試劑提高了抗干擾能力,具有穩定性能較好,可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。


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一、試劑空白吸光度

用蒸餾水做空白,用的空白液加入試劑作為樣品測試,在測試主波長下,記錄測試啟動時的吸光度(A1)和約5分鐘后的吸光度(A2),A2測試結果即為試劑空白吸光度測定值,應符合生產企業給定范圍。這是判定試劑質量的一個有效指標。


二、試劑空白變化速率

對于速率法試劑盒,用的空白液加入試劑作為樣品測試時,在測試主波長下,記錄測試啟動時的吸光度(A1)和約5分鐘(T)后的吸光度(A2),計算試劑空白吸光度變化率(DA/min),應不超過生產企業給定值。測定試劑空白吸光度變化(ΔA/min),用來檢查試劑在工作狀態下的穩定性。但事實上,試劑空白吸光度變化速率無法反映試劑盒的穩定性,試劑空白吸光度變化速率主要反映干擾程度和儀器的穩定性。


三、分析靈敏度

用吸光度差值(ΔA)或吸光度變化(ΔA/min)來表示單位濃度的被測物反應所引起的信號變化,其含義類似摩爾消光系數,應符合生產企業給定范圍。需要注意的是,分析靈敏度不是越高越好,以適合待測物檢測范圍為原則。分析靈敏度一般用于批間比較,較能反映制造商的配方、原料的一致性。


四、線性范圍

取高濃度樣品和低濃度樣品按不同比例混合成5個濃度做線性試驗。線性范圍內的分析性能應符合如下要求:①線性性相關系數r應≥0.990;②線性偏差應不超過生產企業給定值。試劑(盒)的線性范圍越寬,臨床復測幾率越小,但與樣品/試劑比例成反比。


五、重復性

1. 批內重復性 在重復性條件下,用高、中、低三個水平濃度(高、低濃度應超過參考區間20%~30%,中濃度水平在參考區間之內)的控制血清或新鮮人血清測試試劑,重復測試至少10次。

2. 批間重復性 用質量控制血清測試3×3(3個批號,每個批號取3瓶)批間差,較能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或凍干試劑還需測定批內瓶間差,測定同一批號的試劑20瓶,用變異系數(CV)來表示。變異系數(CV)不超過生產企業給定值。


六、準確度

1. 相對偏差 直接用試劑盒測定參考物質(平行3次),評價測定均值與靶值的偏離程度。也可用由參考方法定值的高、中、低三個濃度的人混合血清,用試劑盒平行測定3次,計算均值與定值的相對偏差。

2. 比對試驗 既無參考物質、參考血清,也無標準品,也可用比對試驗來驗證準確度。


七、校準品溯源、質控品賦值

1. 校準品溯源性 根據GB/T21415及有關規定提供校準品的來源、賦值過程及測量不確定度等內容,明確溯源途徑。

2. 質控品賦值有效性 質控品的測定結果應在試劑盒規定的范圍內。


八、ELisa試劑盒穩定性

1. 效期穩定性 取已到效期的試劑盒按以上評價方法對試劑盒性能指標進行評價。

2. 熱穩定性試驗 生化試劑盒一般置2-8℃保存,為了快速有效地評價試劑盒的穩定性,可以用加速試驗來估計。

3. 開瓶穩定性 干粉試劑開瓶后(復溶后)在規定的儲存條件下保存至預期時間內,產品的性能至少應符合線性和準確度的要求。

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