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研域(上海)細(xì)胞系操作過程的方法檢測靈敏度

2023-04-23 [1300]

細(xì)胞系是指直接從機體取出的組織或細(xì)胞獲得單個細(xì)胞并在體外進行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指:組織器官、外周血及胚胎等。由于細(xì)胞系生長緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的1代和傳代到10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為細(xì)胞系培養(yǎng)。總結(jié)了細(xì)胞系的提取的整個操作過程,一起來看看吧!

細(xì)胞系的提取的整個操作過程:

1.整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進行,所有的器材要高壓消毒。

2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。

3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時在右心耳處剪開一個小口,緩慢推動注射器,隨著心臟的跳動,將體內(nèi)的血液沖洗出來。

4.取出小鼠的肺部組織,細(xì)胞系將肺組織切成小米粒樣的大小,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。

5.將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,4度過夜,小鼠處理前,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,消化4個小時。

6.消化4小時后,加入RPMI1640培養(yǎng)基(有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長因子)10ml(添加培養(yǎng)基,可以是正常培養(yǎng)時的2倍量),繼續(xù)培養(yǎng)24小時(繼續(xù)培養(yǎng)的時間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。

7.24小時后,取出肺組織,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。

8.細(xì)胞系的提取和培養(yǎng)是很慢的過程,一般需等到24小時后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的排列情況。

9.細(xì)胞系2-3天換液一次,因為內(nèi)皮細(xì)胞生長形成單層時,會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞生長接近單層時就可以傳代了,不要等到長得非常滿。

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