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ELISA試劑盒實驗重復(fù)性差的原因分析及解決方法

2013-11-15 [3000]

1、ELISA試劑盒樣品數(shù)量不一,加樣時間長短不一;
重復(fù)某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近。
2、樣品加入后未混勻;
加樣后在混勻器上充分混勻。
3、酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對;
TMB顯色用450/630波長.
4、酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差;
校對酶標(biāo)儀。
5、洗滌不正確;
洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時反應(yīng)板面向下,垂直用力甩凈內(nèi)容物(可多甩幾次),在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應(yīng)有堵孔,洗滌應(yīng)充分。
6、溫育條件不一致(一次用水育,一次用恒溫箱)
恒溫箱溫育較水浴顯色深, OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃。
7、不慎多加或少加酶或顯色劑;
多加時顯色深,少加則淺,用記號筆圈上,便于分析。
8、閾值附近時陰時陽;
同一樣品做三個復(fù)孔,以二個(含二個以上相同結(jié)果為準(zhǔn))
9、ELISA試劑盒實驗加樣量不足、保溫時間、洗滌條件一致;

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